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Presens 頂空分析儀 殘氧儀 在搖瓶中培養細菌和哺乳動物細胞

點擊次數:917 更新時間:2022-07-28

細菌和哺乳動物細胞懸浮培養物以(yi)多種方(fang)式使用,例如在生(sheng)物技術中(zhong)用于(yu)生(sheng)產化合物,以(yi)及作(zuo)為(wei)基礎研究中(zhong)的模(mo)型系統。


對于(yu)許多(duo)應(ying)用(yong)(yong),培(pei)養在(zai)液體培(pei)養中(zhong)(zhong)進(jin)行(xing)。該(gai)方法(fa)用(yong)(yong)于(yu)富集不(bu)同(tong)物種或(huo)(huo)為了(le)獲得更多(duo)的(de)(de)(de)(de)(de)細胞質量(liang)(liang)。目前市場(chang)上存在(zai)大(da)量(liang)(liang)用(yong)(yong)于(yu)在(zai)懸浮培(pei)養中(zhong)(zhong)培(pei)養細胞的(de)(de)(de)(de)(de)容器,例如錐形(xing)(xing)瓶(ping)(ping)、旋轉瓶(ping)(ping)、擋板(ban)瓶(ping)(ping)、滾瓶(ping)(ping)和(he)(he)多(duo)孔板(ban)。對于(yu)小(xiao)規模需氧微生物和(he)(he)細胞的(de)(de)(de)(de)(de)篩選(xuan)和(he)(he)工(gong)藝優化(hua)(hua)(hua),通常(chang)在(zai)搖(yao)瓶(ping)(ping)中(zhong)(zhong)生長,因(yin)為它(ta)們代表了(le)進(jin)行(xing)大(da)量(liang)(liang)平行(xing)實(shi)驗的(de)(de)(de)(de)(de)低成(cheng)本且(qie)易于(yu)處理(li)的(de)(de)(de)(de)(de)機會。此(ci)外,搖(yao)動可防止(zhi)沉淀、生物膜形(xing)(xing)成(cheng)和(he)(he)細胞結塊,并促(cu)進(jin)營養物質的(de)(de)(de)(de)(de)均(jun)勻分布。錐形(xing)(xing)瓶(ping)(ping)的(de)(de)(de)(de)(de)主要(yao)缺點是瓶(ping)(ping)內的(de)(de)(de)(de)(de)培(pei)養條件不(bu)斷變化(hua)(hua)(hua),例如營養供應(ying)、耗氧量(liang)(liang)或(huo)(huo)代謝產物的(de)(de)(de)(de)(de)積累。溢出代謝、pH 變化(hua)(hua)(hua)和(he)(he)氧氣限(xian)制通常(chang)在(zai)小(xiao)規模燒瓶(ping)(ping)培(pei)養中(zhong)(zhong)被忽視,并導致后續縮放過程中(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)(de)(de)失(shi)敗。因(yin)此(ci),必(bi)須持續監控文化(hua)(hua)(hua)的(de)(de)(de)(de)(de)狀(zhuang)態(tai)

實時測量

PreSens 提供 SFR vario 和 SFR 搖(yao)瓶讀(du)數器,它們是使用光學化(hua)學傳感(gan)器技術的(de)非侵入式測量系統(tong),可以(yi)測定搖(yao)瓶中的(de) pH 值和氧(yang)氣。SFR 系統(tong)還記錄溫度和攪拌速(su)度 (rpm),這可以(yi)方(fang)便將來在數據分(fen)析過(guo)程(cheng)中參考。

圖 2 顯示了使用(yong)合成培養基(ji)在(zai) 37°C 錐形瓶中(zhong)培養的大腸桿菌 K12培養物的時間過(guo)程。在(zai)培養過(guo)程中(zhong)使用(yong) SFR vario 監測氧氣濃度和 pH 值(zhi)。

為(wei)了(le)抵消(xiao)明顯的氧氣(qi)(qi)限制,您必須(xu)增(zeng)加培(pei)(pei)養(yang)(yang)基的表面(mian),因為(wei)氧氣(qi)(qi)夾帶(dai)僅發生在(zai)培(pei)(pei)養(yang)(yang)基的表面(mian)。氧氣(qi)(qi)輸入依賴(lai)于介質表面(mian)的攪(jiao)(jiao)動,以(yi)使(shi)空(kong)氣(qi)(qi)在(zai)介質中形成小(xiao)氣(qi)(qi)泡。合適的措施包括提高攪(jiao)(jiao)拌速度、優化培(pei)(pei)養(yang)(yang)基體積與燒(shao)瓶體積的比例以(yi)及(ji)使(shi)用帶(dai)擋板的燒(shao)瓶。所有這些措施都支持(chi)氧氣(qi)(qi)輸入。

                                                                                 圖 3

圖(tu) 3 顯示了在(zai) LB 復合(he)培養基(ji)中的兩個平行大腸桿菌(jun) DH5α培養物中使用光學傳(chuan)感器在(zai)線(xian)測(ce)量氧氣(qi)。通過持續(xu)監測(ce)和及時(shi)調整 rpm 氧氣(qi)限制可以(yi)(yi)避免(mian)。在(zai)線(xian)測(ce)量能夠及時(shi)做(zuo)出反應并(bing)控(kong)制氧氣(qi)供應。同時(shi)可以(yi)(yi)立即驗證(zheng)所(suo)采取的措施具有預期的效果。

用于搖動培養物的多(duo)通道設置(zhi)

為了在搖(yao)瓶(ping)中進行測(ce)量,我們提供了兩(liang)種不(bu)同(tong)的系(xi)統(tong)(下圖):SFR vario可(ke)(ke)監測(ce)并(bing)同(tong)時測(ce)量 O 2、pH、生(sheng)物量和可(ke)(ke)選的 CO 2,以(yi)及SFR 搖(yao)瓶(ping)讀數器(qi),可(ke)(ke)測(ce)量多達 9 個(ge)燒瓶(ping)中的 pH 和氧氣. 軟(ruan)件可(ke)(ke)以(yi)控制多達 4 個(ge) SFR 變量,因此可(ke)(ke)以(yi)并(bing)行讀取多達 4 個(ge)燒瓶(ping)。使(shi)用(yong) SFR Shake Flask Reader 最多可(ke)(ke)以(yi)將 7 個(ge)系(xi)統(tong)連接在一起,從而可(ke)(ke)以(yi)同(tong)時監控多達 63 個(ge)燒瓶(ping)。兩(liang)種系(xi)統(tong)都提供自動 OUR 計算(suan)并(bing)監測(ce)錐形(xing)瓶(ping)、培養管或T 型瓶(ping)中的分析(xi)物。


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